辅酶Ⅰ系列试剂盒的样本处理及要求:
1、组织匀浆:用预冷的PBS冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
2、血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4、细胞培养物上清或其它生物标本:取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
辅酶Ⅰ系列试剂盒的注意事项:
1、应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。
2、重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。保存于-20℃对于大多数抗体是适当的;保存于-80℃无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。
3、抗体试剂瓶应置于具有较小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50%的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的,但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性,并且我们的保证仅使用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于-80℃,因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染,如果加入甘油或任何冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。